毛細(xì)管電泳儀是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離,是分析科學(xué)繼液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展,使分析科學(xué)從微升級進(jìn)入到了納升級水平,不僅使單細(xì)胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機。
毛細(xì)管電泳儀分析對進(jìn)樣技術(shù)要求很高,進(jìn)樣操作事項如下。
一、進(jìn)樣區(qū)帶越小越好:
無論采用何種進(jìn)樣方式,毛細(xì)管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細(xì)管總長度,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細(xì)吸附進(jìn)入毛細(xì)管而影響進(jìn)樣量的性。
二、進(jìn)樣時間以短為宜:
通常進(jìn)樣時間,此時毛細(xì)管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。
雖然毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣時間可,但由于毛細(xì)管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液,進(jìn)樣時間過短會影響分析的重復(fù)性。
三、樣品預(yù)濃縮:
受毛細(xì)管內(nèi)總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,毛細(xì)管電泳不能象HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來提高檢測靈敏度,但可采取一些措施來改善。
1、當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)明顯低于電泳緩沖液時,毛細(xì)管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場,使樣品溶液中的分子遷移的更快。當(dāng)這些分子到達(dá)電泳緩沖液邊界時,由于電場減弱,遷移速度減慢,使樣品區(qū)帶由寬變窄,濃度提高,而達(dá)到濃縮的目的。
2、當(dāng)樣品緩沖液和電極緩沖液的電導(dǎo)一樣,而樣品濃度較稀,不適合再作稀釋時,可在進(jìn)樣前先吸入一些水,也能達(dá)到濃縮的目的。
無論采取何種進(jìn)樣方式,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降,會導(dǎo)致此區(qū)帶溫度升高。
四、毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。
五、電極不要和毛細(xì)管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。
六、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進(jìn)樣量的恒定。
七、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強度應(yīng)低于后者。
八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。