毛細(xì)管電泳儀工作原理

　　

　　毛細(xì)管電泳儀采用并行毛細(xì)管電泳（CE）與熒光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，能夠?qū)NA和RNA電泳分離檢測(cè)。毛細(xì)管列陣是并行毛細(xì)管電泳的基礎(chǔ)，根據(jù)毛細(xì)管列陣的毛細(xì)管數(shù)量分為96和12通道，每個(gè)毛細(xì)管首先注入可導(dǎo)電的分離膠，然后對(duì)毛細(xì)管兩端施加電場(chǎng)，96孔板中的預(yù)檢測(cè)樣品開始毛細(xì)管電泳。依據(jù)核酸片段長(zhǎng)度不同在凝膠電泳中遷移速度不同的原理核酸樣品被分離檢測(cè)。

　　

　　毛細(xì)管電泳儀分析對(duì)進(jìn)樣技術(shù)要求很高，進(jìn)樣操作事項(xiàng)如下：

　　

　　一、進(jìn)樣區(qū)帶越小越好：

　　

　　無(wú)論采用何種進(jìn)樣方式，毛細(xì)管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細(xì)管總長(zhǎng)度的1%～2%，以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細(xì)吸附進(jìn)入毛細(xì)管而影響進(jìn)樣量的性。樣品管中溶液少為5μL，進(jìn)樣體積為1～50nL。

　　

　　二、進(jìn)樣時(shí)間以短為宜：

　　

　　通常進(jìn)樣時(shí)間為0.5～1s，此時(shí)毛細(xì)管粘附的樣品量相對(duì)于吸入的體積可忽略不計(jì)。

　　

　　雖然毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣時(shí)間可至±0.1s，但由于毛細(xì)管插入樣品管時(shí)不可避免地會(huì)粘附一些溶液，進(jìn)樣時(shí)間過(guò)短會(huì)影響分析的重復(fù)性。

　　

　　三、樣品預(yù)濃縮：

　　

　　受毛細(xì)管電泳儀毛細(xì)管內(nèi)總體積的制約，對(duì)于濃度很稀的樣品，毛細(xì)管電泳不能象HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來(lái)提高檢測(cè)靈敏度，但可采取一些措施來(lái)改善。

　　

　　1、當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)明顯低于（100倍以上）電泳緩沖液時(shí)，毛細(xì)管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個(gè)更大的電場(chǎng)，使樣品溶液中的分子遷移的更快。當(dāng)這些分子到達(dá)電泳緩沖液邊界時(shí)，由于電場(chǎng)減弱，遷移速度減慢，使樣品區(qū)帶由寬變窄，濃度提高，而達(dá)到濃縮的目的。

　　

　　2、當(dāng)樣品緩沖液和電極緩沖液的電導(dǎo)一樣，而樣品濃度較稀，不適合再作稀釋時(shí)，可在進(jìn)樣前先吸入一些水，也能達(dá)到濃縮的目的。

　　

　　無(wú)論采取何種進(jìn)樣方式，上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢(shì)陡降，會(huì)導(dǎo)致此區(qū)帶溫度升高。

　　

　　四、毛細(xì)管插入樣品溶液后，應(yīng)立即開始進(jìn)樣操作，完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會(huì)產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象，引起誤差并使譜帶展寬。

　　

　　五、電極不要和毛細(xì)管接觸，樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。

　　

　　六、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度，而影響進(jìn)樣量的恒定。

　　

　　七、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶，前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。

　　

　　八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。